“微生物组(microbiome)是特定时间特定生境中微生物群所包含的基因序列(含同源序列)的总和。
病毒宏基因组又称宏病毒组(Virome),是在宏基因组学理论的基础上,结合现有的病毒学和分子生物学技术而兴起的一个新的学科分支。
宏病毒组突破了传统技术方法的局限,直接以环境或组织中所有病毒的遗传物质为研究对象,能够快速准确的鉴定样本中所有的病毒组成,是一种发现新病毒、研究病毒群体结构和多样性、监控病毒变异和进化研究的有力手段。在病毒发现、病毒溯源、微生物预警等方面具有重要作用。
未来研究趋势
近年来不少宏病毒组的高分文章发表,研究对象包括土壤、水体和人体,正说明了宏病毒组受到了各界科研人士的关注,并且作为后续研究的目标,正所谓“小病毒,无处不在;病毒组,大有未来!”
技术路线
病毒无处不在,但无论是人组织、海洋或土壤样品中,病毒都因为其基因组较小所以含量较低,并且宿主成分在复杂的样本中难以去除,因此病毒富集是宏病毒组的难关。而中天伟能科学研发团队研发了两种高效的病毒富集方案,助科研工作者迈过难关,为宏病毒组研究进程加速!
超速离心法:借助超速离心机对已初步过滤的样本进行24h以上的蔗糖密度梯度离心,可有效地将样本中的病毒颗粒与原核生物、细胞碎片等分离。
VirOne竞争沉淀法:采用原创的VirOne竞争沉淀法,可竞争性束缚水分子并中和表面电荷,从而迫使VLPs组分从溶液中析出,并通过常规离心方法快速收集病毒颗粒沉淀。
以上两种方案均经过大量样本测试证明,均可大幅度提高测序数据中病毒有效数据的比例,为后续的分析结果提供可靠的保障。
单病毒基因组以培养或自然样本中病毒为研究对象,先分离单个病毒颗粒并进行全基因组扩增,获取基因组序列信息后对病毒进行鉴定,并根据目标病毒的参考基因组情况配置相应的分析流程。
通过对病毒进行全基因组学测序分析,将很大程度上利于鉴定新发的传染病、开发快速检测试剂、开发疫苗、药物和推测传播途径。此外,对于提升我们对病毒多样性、适应性、生态学特性以及进化的理解具有重要意义。
细菌完成图是指综合利用二代或三代测序技术,根据菌株具体信息进行基因组测序组装,最终可以得到无gap的完整基因组序列。细菌完成图可获得细菌全面丰富的基因组信息,从而在致病性、耐药性、环境适应性等多角度进行功能基因的深入挖掘,对微生物不同表型等特性进行深层次研究。
真菌精细图是指利用二代及三代测序技术,获得较高质量真菌基因组组装结果,从而实现对真菌基因组结构和功能等方面较深入系统的研究。
微生物重测序,是指通过与近缘参考基因组比对,而对某个微生物进行高通量数据分析的测序分析技术。通过重测序可以获得目标微生物基因组对于参考基因组的 SNP、InDel、SV等一系列变异信息,并尝试对基因组之间的性状差异进行预测和解析,从而完成目标微生物的研究。
细菌框架图是一种较初步的细菌全基因组测序方式,通过二代Illumina测序仪对细菌基因组进行测序和相应组装步骤,最后获得细菌基因组草图。细菌框架图项目性价比高,能够满足细菌基因组研究的基本需求。
宏转录组测序是以特定环境中的整个微生物群落作为研究对象,它摆脱了微生物难分离难培养的技术限制,只需从样品中提取全部微生物的总RNA进行测序。
宏转录组测序采用Novaseq第二代高通量测序平台,对样品中微生物群落的RNA做全面测序,经过组装、基因预测、基因注释与丰度计算等分析,挖掘样品中物种组成、功能基因转录调控和代谢通路等遗传多样性和分子生态信息。
产品特点
l 可以从转录水平鉴定微生物群落,研究群落特征;
l 鉴定目标病原体;
l 挖掘活性微生物及功能;
l 关注关键基因,探索基因功能与代谢途径。
高通量转录表达谱(HT-RNAseq)是基于已经在单细胞转录组中应用成熟的3'端建库技术建立的真核转录组产品,可简化建库实验环节并节省建库成本,对mRNA的3'端附近序列进行测序并快速得到基因定量和差异分析结果,适用于大部分真核生物样品,甚至是FFPE样品。
真核转录组按照是否有参考基因组,主要分为两大类,真核有参转录组和真核无参转录组。
真核有参转录组:是指对已有参考基因组的真核生物或其组织、细胞等进行转录组测序。测序结果通过与参考基因组比对,可验证转录组测序的测序饱和度和基因覆盖度,同时可获得基因结构、基因表达差异和可变剪接等信息。
真核无参转录组:是指在没有参考基因组的情况下,对真核生物转录组进行测序。真核无参转录组测序时,首先,在获得原始数据后,需要对数据进行质控拼接为unigene,再以unigene为参考序列进行后续分析。也可以对多个样本进行差异基因表达分析和差异基因功能富集分析等,用于发现功能基因,为下一步研究提供方向。
产品特点
l 高覆盖度:单次转录组测序实验即可获取全面的编码 RNA 信息;
l 注释信息丰富:通过与各大数据库进行比对,可获得较为完整的转录组注释信息;
l 关联分析:可联合多个组学数据,开展跨组学关联分析。
原核转录组测序是指利用高通量测序技术对原核生物的转录本进行测序,全面快速地获取特定微生物在特定状态下的所有转录本的信息。通过转录组测序不仅能够对mRNA进行表达定量分析,分析差异表达基因及其相应功能,同时还能够分析sRNAs,揭示微生物不同表型形成的分子调控机制和功能。
产品特点
l 利用试剂盒去除 rRNA,rRNA 去除效率好,数据质量高;
l 采用链特异性建库,建库稳定性好;
l 除进行 mRNA 定量分析外,还可以进行转录本结构分析等;
l 可以同时进行 mRNA 、 sRNA 预测和变异分析等,更加全面解读表达互作网络。